BIOMETRIA HEMATICA

-HEMOGLOBINA-

La hemoglobina (Hb) es una heteroproteína de la sangre, de peso molecular 64.000 (64 kD), de color rojo característico, que transporta el oxígeno desde los órganos respiratorios hasta los tejidos, en mamíferos, ovíparos y otros animales.

La hemoglobina es un pigmento de color rojo, que al interaccionar con el oxígeno toma un color rojo cereza, que es el color de la sangre arterial y al perder el oxígeno toma un color rojo oscuro, que es el color característico de la sangre venosa. Es una proteína conjugada de color rojo

Integrantes de los eritrocitos entre un 31-34%.

La forman cuatro cadenas polipeptídicas (globinas) a cada una de las cuales se une un grupo hemo, cuyo átomo de hierro es capaz de unirse de forma reversible al oxígeno. El grupo hemo se forma por:
Unión de la Succinil CoA (formado en ciclo de Krebs o ciclo del ácido cítrico) a un aminoácido glicina formando un grupo pirrol.

Cuatro grupos pirrol se unen formando la Protoporfirina IX.
La protoporfirina IX se une a una molécula de hierro ferroso (Fe2+) formando el grupo hemo.

Existen varios métodos para determinación como hematina ácida, hematina alcalina, oxihemoglobina, carboxihemoglobina y cianometahemoglobina; éste último es el de elección por que es estable en soluciones diluidas, porque existen en el mercado estándares de cianometahemoglobina y porque las lecturas se pueden hacer en espectrofotómetro de uso común y corriente.

Cuando la hemoglobina está unida al oxígeno, se denomina oxihemoglobina o hemoglobina oxigenada, dando el aspecto rojo o escarlata intenso característico de la sangre arterial. Cuando pierde el oxígeno, se denomina hemoglobina reducida, y presenta el color rojo oscuro o bordó de la sangre venosa (se manifiesta clínicamente por cianosis)

La sangre se hemoliza por agregado de un agente denso activo, con el ferrocianuro de potasio se oxidan el átomo de fierro de ferroso a férrico para producir metahemoglobina. El cianuro de potasio estabiliza la metahemoglobina pasando de cianometahemoglobina. La cloración producida es directamente proporcional a la concentración de hemoglobina presente.

Valores de referencia:
Mujeres: 12 -14 gr/dl

Mujeres embarazadas: 11-14 gr/dl

Hombres: 13-19gr/dl

Recién nacidos: 13.19gr/dl

http://es.wikipedia.org/wiki/Hemoglobina

DETERMINACION DE HEMOGLOBINA

*Material*

Tubos de ensayo de 13 x 100 ml
Pipetas de 1ml
Pipetas de Salí
Boquillas
Gradillas
Gasa
Celdas para espectrofotómetro
Sangre capilar o venosa con anticoagulante.
Reactivos:
EDTA al 10 % (.07 ml por .5 ml de sangre)
Reactivo DE Drabkin:
-ferrocianuro de potasio
-cianuro de potasio
-bicarbonato de potasio
Solución estándar de cianometahemoglobina.

*Procedimiento:*

1.- Colocar en un tubo de ensayo 5 ml de reactivo de Drabkin
2.- Homogeneizar bien la sangre
3.- Llenar en sangre hasta la marca de la pipeta de Sahli
4.-Mezclar la sangre con el disolvente
5.- Dejar Reposar 10 min. Para la formación de cianometahemoglobina
6.- leer a 540 nanómetros en el espectrofotómetro contra un blanco de reactivo.
7.- comparar con la curva calibrada de estándares.